在miRNA研究中，miRNA与基因靶向关系的验证是一个关键环节。miRNA通过其种子序列（5’端第2-8个碱基）靶向结合mRNA的3’UTR区域，从而诱导细胞内沉默复合体介导的mRNA降解或抑制mRNA的翻译过程。

基于此原理，我们可以将目标基因的3'UTR区（或结合位点下游500bp）插入到荧光素酶报告基因载体luciferase的下游。通过与miRNA mimics共同转染目标细胞并添加底物，检测荧光素酶活性的变化。如果荧光素酶活性下调，则表明该miRNA与靶基因的3'UTR区域存在相互作用。

常用的载体有PGL3-CMV-LUC-MCS，其示意图为miRNA与3'UTR报告基因的工作原理。双荧光素酶报告基因检测用于验证miRNA与靶基因3'UTR的相互作用，其主要步骤包括：

1. 利用生物信息学分析软件（如TargetScan、StarBase和miRanda等）预测miRNA靶基因的3'-UTR区序列是否存在miRNA结合位点。
2. 将预测能够与miRNA结合的靶基因3'-UTR序列插入载体中的萤火虫荧光素酶（Firefly luciferase）的3'-UTR。当miRNA与质粒中的插入序列结合后，将抑制萤火虫荧光素酶的翻译，从而导致荧光值的降低。
3. 进行miRNA与靶基因的相互作用的结构学验证及实验步骤的结果分析。

通过这些步骤，双荧光素酶报告基因检测可以有效地验证miRNA与靶基因3'UTR的相互作用，为研究miRNA的功能和调控网络提供重要工具，助力生物医学研究的深入推进。

尊龙凯时双荧光素酶报告基因检测服务流程

详细的操作步骤包括所需的材料与准备：

• 细胞：HEK293细胞或指定目的细胞
• 转染试剂：可选择HieffTrans® invitrosiRNA/miRNA转染试剂（货号：40806ES）
• 报告基因检测试剂盒：Dual Luciferase Reporter Gene Assay Kit（货号：11402ES）
• 其他仪器：酶标仪、细胞培养板等

在进行目的细胞验证实验时，首先需确认目的细胞的质粒瞬转效率，并摸索合适的瞬转体系。当质粒瞬转效率达到40%以上时，即可进行实验。在细胞生长状态良好时，进行转染实验，并在转染48小时后收集细胞样品。

对于细胞样品的收集，步骤包括：

1. 从培养箱取出靶细胞，轻轻吸净培养液，并用PBS洗涤两次。
2. 弃去PBS后，添加100μL的1×PLB进行细胞裂解，并将样品转移至EP管中，保存在-80度冰箱中。

随后，根据报告基因检测试剂盒的说明书进行检测。荧光素酶检测需要设置合适的测定参数，确保结果的准确性。

常规检测分组包括mimics NC+对照质粒、mimics NC+3’UTR野生型质粒、mimics+3’UTR突变型质粒等各类组合。通过尊龙凯时提供的双荧光素酶报告基因检测服务，能够有效加速基础研究及药物筛选的进展。

相关产品清单

产品类别及具体信息如下：

• 双荧光素酶报告基因检测试剂Dual Luciferase Reporter Gene Assay Kit（货号：11402ES）
• 辉光型双荧光素酶报告基因检测试剂盒（货号：11405ES）
• HieffTrans® Liposomal转染试剂（货号：40802ES）
• HieffTrans® invitrosiRNA/miRNA转染试剂（货号：40806ES）
• HieffTrans® mRNA转染试剂（货号：40809ES）

通过以上详尽的流程和产品介绍，尊龙凯时致力于为科研工作者提供高质量的实验服务和优质的产品选择，助力生物医疗领域的发展。