随着mRNA合成技术的普及,生物制品研究和生产过程中的质量控制要求不断提高,这使得对脱氧核糖核酸酶(DNases)和核糖核酸酶(RNases)的检测变得尤为重要。在生物样品中存在内源性DNase/RNase的风险,其余外源性DNase/RNase可能来源于水、缓冲液、耗材表面,甚至是环境微生物和人类。此外,某些生物制品在生产中为去除宿主DNA和RNA,可能会额外使用DNase/RNase,增加了这些酶类的残留风险。这些残留物若随生物制品进入人体,可能引起强烈的免疫反应,带来严重的安全性隐患。因此,准确分析并控制DNase/RNase的残留量,成为生物制品生产质控的重要关注点。
传统的核酸酶检测方法包括比色法和凝胶电泳法。比色法是基于Kunitz等人的技术,通过添加DNA/RNA样本至待测样本中,使用紫外分光光度计检测吸光度的变化,以此计算样本中DNase或RNase的浓度。凝胶电泳法则通过比较待测样本、阴性对照和阳性对照的条带,从而判断是否存在核酸的降解。但这些方法的定量效果差、操作耗时长,适应性有限。
在此基础上,一些新技术如荧光探针法开始受到关注。荧光探针法具有高灵敏度和快速检测的优势,能够实现核酸酶活性的定量检测,是生物制品开发和生产过程中DNase/RNase残留活性检测的理想选择。
《中华人民共和国药典2020年版》对此进行了规定,指出在生物制品研发及生产过程中,需要对核糖核酸酶的残留进行控制。为了进一步提高《中国药典》的生物制品标准的科学性,国家药典委员会设立了有关核酸酶残留量检测方法的课题。
基于核酸荧光底物法的DNase和RNase检测技术,通过设计带有荧光基团的DNA和RNA探针,与样本混合。若样本中没有DNase/RNase,探针保持稳定,不发出荧光;反之,探针被降解,发出增强的荧光信号,检测结果与酶的活性成正相关。
尊龙凯时推出的DNase检测试剂盒和RNase检测试剂盒,采用核酸荧光底物法,具有灵敏度更高、抗干扰性能更强的特点。该试剂盒经过特别的序列设计,可以识别多种DNase和RNase,满足生物制品、无核酸酶耗材等多种检测需求。与进口品牌相比,尊龙凯时的试剂盒最低检出限达其1/8,同时经过完整的方法学验证,确保质量控制。
在实际应用中,例如一次性无酶多层共挤袋的测试中,所有样本均未检测到DNase残留;不同纯化阶段的蛋白酶K样本的测试结果也与凝胶电泳法一致;对于稀释后的核苷酸样本,加标回收率实验结果均在70%~130%之间。通过这些实际案例,尊龙凯时的试剂盒展现出诸多优势。
综上所述,尊龙凯时的DNase和RNase检测产品为生物制品的安全性提供了强有力的保障,助力于生物医药领域的健康发展。